Pour la méthode de terminaison de chaîne vous devez ADN simple brin. Ces acide nucléique à séquencer est incorporé dans un vecteur. Par la suite, ce mode miroir synthétisé en plusieurs étapes de réaction qui correspond à des brins d'ADN de longueurs différentes.

Chaîne méthode de terminaison - L'analyse de la séquence classique de Sanger-Coulson

1. Tout d'abord, l'ADN à séquencer section est installé dans le vecteur M13 par voie enzymatique. En outre, une enzyme d'ADN-anabolique (polymerase) et un court oligonucleotide qui se trouve à seulement quelques paires de bases de longueur. Ceci est le point de départ pour la synthèse du brin de l'image-miroir de brin d'ADN.
2. Dans l'étape suivante de l'analyse de séquence par Sanger un définit la réaction de chaque ajoutés quatre didésoxynucléotides. Ceux-ci sont marqués de manière radioactive ou avec un colorant fluorescent et par ailleurs de la même main utilisée dans la construction d'ADN naturel nucleotides d'adénosine, cytidine, guanosine et thymidine. Contrairement à leurs ennemis naturels, les didésoxynucléotides ont aucun groupe 3'-OH. Cependant, cela est nécessaire pour constituer un brin d'ADN en continu, à savoir le nucléotide suivant à être relié à l'extrémité du brin. Par conséquent, la synthèse du brin arrête après l'installation d'un didésoxynucléotide. Cette résiliation est éponyme pour la méthode de terminaison de chaîne.
3. Il est impossible de prédire quand un didésoxynucléotide est incorporé dans le nouveau brin d'ADN et conduit à la résiliation. Par conséquent, dans chacun des quatre mélanges réactionnels sont constitués de différents fragments d'ADN de longueur qui se terminent par un didésoxy adénosine, cytidine, guanosine ou thymidine.

L'analyse de séquence par Sanger - Résultat

A la fin de l'analyse de la séquence obtenue par Sanger classique quatre réactions, chacune avec un mélange de fragments d'ADN de longueurs différentes. Ces mélanges sont répartis séparément pour l'adénosine, la cytidine, la thymidine, la guanosine et dans un gel ou dans des capillaires. Depuis les didésoxynucléotides sont marqués radioactivement ou par différents colorants fluorescents (rouge, vert, bleu, jaune), les fragments d'ADN peuvent être visualisées. L'information est recueillie par un laser et le détecteur, un ordinateur et ensuite calculé à partir des données de fluorescence, la séquence exacte de bases dans la molécule d'ADN. Ainsi, l'apparition de la séquence de bases (séquence) du génome obtient scientifique pour être examiné.

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